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A caracterização funcional de transportadores é dificultada pelo alto custo e pelos desafios técnicos dos ensaios de transportadores atuais. Assim, neste trabalho, desenvolvemos um novo fluxo de trabalho de caracterização que combina síntese de proteínas livre de células (CFPS) e eletrofisiologia baseada em membranas suportadas em sólido (SSME). Para isso, a síntese de proteínas de membrana foi realizada em um sistema celular livre de troca contínua (CECF) na presença de nanodiscos. Os transportadores resultantes expressos em nanodiscos foram incorporados em proteolipossomos e analisados na presença de diferentes substratos usando o leitor de eventos eletrogênicos de superfície. Como prova de conceito, validamos esse fluxo de trabalho para expressar e caracterizar cinco transportadores diversos: os antiportadores EmrE e SugE acoplados a medicamentos/H+, a permease de lactose LacY, o antiportador Na+/H+ NhaA de Escherichia coli, e o transportador mitocondrial AAC2 de Saccharomyces cerevisiae. Para todos os transportadores, parâmetros cinéticos, como KM, IMAX e dependência de pH, foram avaliados. Este fluxo de trabalho robusto e expedito (por exemplo, pode ser executado em apenas cinco dias úteis) oferece uma avaliação funcional direta conveniente da atividade da proteína transportadora e tem a capacidade de facilitar aplicações de transportadores na pesquisa médica e biotecnológica.
Dong et al. (Qui,) estudaram essa questão.