340 Anti-CD20 atenua as respostas imunes humoral e celular no pulmão: implicações para terapia gênica na Fibrose Cística

OBJETIVOS/GOALS: A readministração de terapias gênicas inalatórias tem o potencial de superar baixas eficiências de correção e respostas imunes limitantes observadas em ensaios anteriores de terapia gênica para Fibrose Cística. Portanto, testamos a hipótese de que o pré-tratamento com um anticorpo α ± CD20 que depleta células B permitiria a readministração do vetor. MÉTODOS/POPULAÇÃO DO ESTUDO: Primeiramente, selecionamos vetores adenovirais (Ad) para estudo inicial devido à sua conhecida capacidade de elicitar potentes respostas imunes. Camundongos foram tratados com um anticorpo α ± CD20 depletante ou controle de isótopo 2 dias antes da entrega do Ad-Luc. 4 semanas depois, os camundongos foram eutanasiados para avaliar o desenvolvimento de respostas imunes anti-vetor. Citometria de fluxo e sequenciamento de RNA de célula única foram utilizados para avaliar o desenvolvimento de células de memória residente nos pulmões. As respostas de anticorpos séricos e das vias aéreas foram avaliadas por ELISA. Após 4 semanas, os camundongos foram tratados com Ad-LacZ e eutanasiados 3 dias depois para avaliar a eficiência da transferência gênica de segunda rodada através do ensaio de atividade de β-galactosidase. Métodos semelhantes foram utilizados em um experimento piloto com vetor de vírus adeno-associado (AAV), mas com eutanásia 3 semanas após a transferência gênica secundária. RESULTADOS/RESULTADOS ANTECIPADOS: A entrega de vetores Ad leva ao desenvolvimento de células B e T de memória residente no pulmão. A depleção de células B antes da entrega do primeiro vetor atenuou a infiltração de células T nas vias aéreas e a produção sérica de IgG, abrogou a produção de IgG e IgA mucosal, e resgatou completamente a transferência gênica secundária. Modelos de camundongos geneticamente modificados sugerem que anticorpos secretados são críticos na prevenção da re-administração do vetor. Os vetores AAV mostraram ser menos imunogênicos do que os vetores Ad, com apenas redução parcial da transferência gênica de segunda rodada. No entanto, anti-CD20 não proporcionou benefício para a readministração de AAV. DISCUSSÃO/IMPORTÂNCIA: A imunidade humoral mucosal é crítica na prevenção da re-administrarão de vetores adenovirais. O comprometimento das respostas de células B pelo tratamento com α ± CD20 antes da entrega do vetor permite re-administração e pode ajudar a superar as baixas eficiências da terapia gênica para FC. Os vetores AAV podem ser menos suscetíveis à neutralização por imunidade pré-existente.