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Na biologia sintética, chassis microbianos, incluindo o fermento Saccharomyces cerevisiae, são projetados iterativamente com complexidade e escala crescentes. Ferramentas de engenharia genética em laboratório úmido são desenvolvidas e otimizadas para facilitar a construção de cepas, mas muitas vezes são incompatíveis entre si devido a elementos regulatórios compartilhados, como o promotor induzível por galactose (GAL) em S. cerevisiae. Aqui, prototipamos a indução de quebras de fita dupla de DNA (DSBs) mediadas por I-SceI induzidas por cianamida para reciclagem de marcadores seletivos na engenharia metabólica de leveduras. Além disso, combinamos a DSB mediada por I-SceI induzida por cianamida e a seleção negativa mediada por MazF induzida por maltose para substituição de promotores in situ sem plasmídeo, o que simplificou o procedimento de clonagem molecular para a caracterização de promotores em S. cerevisiae. Em seguida, caracterizamos três promotores induzíveis por tetraciclina de força diferencial, um promotor não vazante induzível por β-estradiol, o promotor DDI2 induzido por cianamida, promotores bidirecionais MAL32/MAL31, e cinco pares de promotores bidirecionais GAL1/GAL10. No geral, controles regulatórios alternativos para ferramentas de engenharia do genoma são importantes para a construção de genótipos complexos em sistemas microbianos para aplicações de biologia sintética e engenharia metabólica.
McDonnell et al. (Wed,) studied this question.