Estabelecimento do método de diluição de óxido de deutério como uma nova possibilidade para determinar a permeabilidade da água transendotelial

Resumo O aumento da permeabilidade da água transendotelial é um fator etiológico essencial em uma variedade de doenças como edema e choque. Apesar da alta relevância clínica, até agora não havia um método preciso para detectar o fluxo de água transendotelial. O método de diluição de óxido de deutério (D2O), já estabelecido para medir o transporte de água transepitelial, foi utilizado para determinar precisamente a permeabilidade da água transendotelial. Ele detectou o fluxo adequado de água transendotelial induzido por diferentes forças hidrostáticas. Isso foi demonstrado em quatro tipos diferentes de células endoteliais. O arranjo experimental geral foi verificado por gravimetria e espectroscopia de absorção. A determinação da resistência elétrica transendotelial (TEER) e a coloração imunoquímica para proteínas dos contatos célula-célula foram realizadas para garantir que não houve dano ao endotélio devido às medições. Além disso, a função da barreira endotelial foi modulada. A medição do fluxo de água transendotelial foi verificada pela medição da TEER, do coeficiente de permeabilidade aparente e da capacitância elétrica. Substâncias promotoras de barreira como o monofosfato cíclico de adenosina e iloprost reduziram a TEER e a capacitância elétrica e aumentaram a permeabilidade. Isso foi acompanhado por um fluxo de água transendotelial reduzido. Em contraste, substâncias danosas à barreira como trombina, histamina e bradicinina reduziram a TEER e a capacitância elétrica, mas aumentaram a permeabilidade. Aqui, foi demonstrado um aumento do fluxo de água. Este método in vitro recém-estabelecido para medição direta da permeabilidade da água transendotelial foi verificado como uma técnica altamente precisa em vários ensaios. O uso de células endoteliais específicas do paciente permite a medicina de precisão individualizada no contexto da pesquisa básica sobre edema, por exemplo, em relação ao desenvolvimento de produtos farmacêuticos protetores da barreira.