Avanços recentes na caracterização de pontes de dissulfeto: Insights da espectrometria de massas

Justificativa As pontes de dissulfeto (DSB) desempenham um papel importante na estabilização das estruturas tridimensionais de biofármacos, proteínas purificadas únicas e vários fármacos peptídicos cíclicos que contêm dissulfetos em suas estruturas. O entrelaçamento incorreto, conhecido como embaralhamento de DSB, resulta em estruturas mal dobradas que podem ser inativas, imunogênicas e suscetíveis à agregação. Muito poucos artigos foram publicados sobre a anotação experimental de DSBs em proteínas e fármacos peptídicos cíclicos. A caracterização precisa da ligação de dissulfeto é essencial para compreender a confirmação da proteína. Métodos A caracterização de DSBs utilizando espectrometria de massas (MS) envolve a digestão química e enzimática das amostras para obter fragmentos peptídicos menores, tanto em formas reduzidas quanto não reduzidas. Subsequentemente, essas amostras são analisadas usando MS para localizar o DSB, seja através da interpretação ou empregando várias ferramentas de software. Resultados O principal desafio nos métodos de análise de DSB utilizando preparação de amostras é obter uma solução de amostra na qual DSBs não nativos não sejam formados devido ao pH alto, temperatura e presença de grupos tiol livres. A formação de DSBs não nativos pode levar a uma anotação errônea da ligação de dissulfeto. Técnicas de preparação de amostras, métodos de fragmentação para análise de DSB e abordagens contemporâneas para mapeamento de DSB utilizando essa fragmentação foram discutidos. Conclusões Esta revisão apresenta os mais recentes avanços na caracterização baseada em MS; também uma perspectiva crítica é apresentada para a anotação adicional de DSBs usando MS, principalmente para proteínas purificadas únicas ou peptídeos que estão densamente conectados e ricos em cisteína. Apesar dos avanços significativos resultantes dos progressos em MS, a análise de ligações de dissulfeto não é simples; requer especialização em preparação de amostras e interpretação.