A importância da microbiota intestinal para a saúde humana tem recebido crescente atenção. Consequentemente, a metabolômica tem sido utilizada para elucidar as interações hospedeiro–microbiota. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS) é uma escolha ideal para análise do metaboloma da microbiota intestinal devido às suas capacidades quantitativas. Contudo, o LC-MS/MS convencional requer múltiplas colunas, múltiplas fases móveis e procedimentos complexos para otimizar condições para cada metabólito alvo. Para superar estas limitações, desenvolvemos um método quantitativo serial por LC-MS/MS, denominado Kobe University Serial LC-MS/MS Analysis using Multiple columns with a Single mobile phase (KUSLAMS). Esta plataforma integra duas colunas (PFPP e C18) e um método de derivatização para quantificação contínua, de alta produtividade, de 215 metabólitos, incluindo aminoácidos, nucleotídeos, ácidos carboxílicos, aminas e ácidos graxos. A reprodutibilidade da análise repetida foi avaliada usando 82 metabólitos intracelulares da microbiota intestinal, para os quais novos métodos analíticos foram desenvolvidos. Desses, 64 metabólitos foram detectados com coeficientes de variação (CV) abaixo de 15%. A aplicação do KUSLAMS a um sistema de cultura in vitro da microbiota intestinal com e sem inulina revelou diferenças nas concentrações de 21 metabólitos intracelulares e 14 extracelulares. Notavelmente, vários metabólitos exibiram aumentos intracelulares e diminuições extracelulares, sugerindo uma possível ligação entre acúmulo intracelular e depleção extracelular, embora essa interpretação seja exploratória. Estes resultados indicam que o KUSLAMS permite o monitoramento simultâneo da dinâmica dos metabólitos intra e extracelulares. Em conjunto, esses achados demonstram que o KUSLAMS é uma plataforma robusta e versátil para exploração dos metabólitos derivados da microbiota relevantes para a saúde humana.
Yoshida et al. (Mon,) estudaram esta questão.