Identificação de proteínas ovinas alvejadas pela ISGilação induzida pela gravidez e inferência sobre a função I: Endométrio

O estabelecimento da gravidez em ruminantes depende da produção de interferon-tau (IFNT) pelo conceptus, que estimula a produção de gene estimulado por interferon 15 (ISG15) nos tecidos maternos. O ISG15 se liga covalentemente (ISGilação) e regula processos de proteínas intracelulares de maneira semelhante à ubiquitina. O objetivo deste estudo foi identificar proteínas ISGiladas e inferir suas funções específicas e vias bioquímicas dentro do endométrio. O endométrio foi coletado de ovelhas grávidas no dia 17 (P17, n=4), ovelhas sincronizadas não inseminadas no Dia 10 (EC10, n=4) e no Dia 17 (EC17, n=4) após o estro (Dia 0). Além disso, células endometriais bovinas (BEND) foram cultivadas com 10 ng/ml de IFNT bovino recombinante (rb) por 24 h. As proteínas ISGiladas nos extratos protéicos foram imunoprecipitadas com anticorpo anti-ISG15 bovino. As proteínas ISGiladas nos eluídos foram identificadas usando Cromatografia Líquida-Cromatografia em Tandem de Espectrometria de Massas e confirmadas por imunoprecipitação recíproca de proteínas ISGiladas selecionadas. Setenta e cinco proteínas ISGiladas foram expressas diferencialmente no endométrio de ovelhas EC10, EC17 e P17. A análise da via de engenhosidade indicou que a sinalização de interferon α/β, o mecanismo antiviral ISG15, Glicólise I e Gluconeogênese I foram as vias mais altamente significativas induzidas no endométrio grávido. A enriquecimento das proteínas ISGiladas STAT1, MX1 e ENO1 foi alcançado por imunoprecipitação com anticorpos específicos e sua conjugação ao ISG15 foi confirmada. As proteínas endometriais ISGiladas identificadas no endométrio grávido ovino podem funcionar na sinalização de IFN, mecanismos antivirais e metabolismo de glicose com implicações para essas vias na preparação do endométrio para a implantação bem-sucedida e manutenção da gravidez.