Alvo de Populações Neuronais Definidas na Medula Espinhal Mediado por AAV9 Através de Injeção Intratecal

Contexto: Vírus adeno-associados (AAVs) são vetores estabelecidos para entrega eficiente de genes ao sistema nervoso central (SNC). Estratégias crescentes visam restringir a transdução a subtipos neuronais específicos definidos pelas propriedades funcionais associadas, aumentando assim a precisão e o potencial terapêutico. Métodos: Vetores recombinantes AAV9 carregando repórteres fluorescentes sob o controle dos promotores citomegalovírus (CMV), sinóptico humano (hSyn) ou homeobox 9 (Hb9) foram administrados por via intratecal em ratos Wistar. A expressão do transgene foi avaliada 7 dias após a injeção por microscopia confocal. Os neurônios nas lâminas VII–X foram quantificados nos níveis cervical, torácico, lombar e sacral da medula espinhal. A análise estatística foi realizada usando o teste de Kruskal–Wallis seguido dos testes de Mann–Whitney U com correção de Bonferroni. Resultados: Na lâmina VII, expressão neuronal consistente foi mediada por hSyn em todos os níveis espinhais, com transdução significativamente maior nos níveis cervical comparados aos torácicos e lombares (p < 0,01). CMV e Hb9 não mostraram tropismo detectável para esta lâmina. Na lâmina VIII, CMV promoveu expressão muito maior que hSyn e Hb9, com diferença de 2,8 vezes no nível lombar (p < 0,001). Na lâmina X, a expressão do CMV superou a do hSyn nos níveis lombar e sacral (p < 0,05), enquanto Hb9 não mostrou atividade. Na lâmina IX, todos os promotores mediaram transdução de motoneurônios, mas somente Hb9 restringiu a expressão especificamente aos somas dos motoneurônios. Notavelmente, CMV induziu expressão fora do alvo em células gliais. Conclusões: Os padrões de expressão mediados por AAV9 na medula espinhal são fortemente influenciados pela escolha do promotor e pelo nível segmentar. Hb9 fornece alta especificidade para motoneurônios, hSyn apoia ativação neuronal ampla nas lâminas VII–X, enquanto CMV dirige expressão robusta mas não específica com atividade fora do alvo significativa. Estes achados destacam a importância da seleção racional do promotor para terapia gênica da medula espinhal e estratégias visando recuperação funcional em distúrbios do sistema motor.