Sequência nucleotídica de um cluster de genes de biossíntese de enterobactina de Escherichia coli: identificação de entA e purificação de seu produto 2,3-diidro-2,3-diidroxibenzoato desidrogenase

A sequência nucleotídica de uma região do cromossomo de Escherichia coli que codifica parte de um cluster de genes envolvidos na biossíntese do quelante de ferro enterobactina foi determinada. Quatro quadros de leitura abertos intimamente vinculados, correspondendo às regiões codificantes de entE (144 aminoácidos carboxila-terminal), entB (32.554 daltons), entA (26.249 daltons) e um gene não identificado (P15) que codifica uma proteína de 14.970 daltons, foram encontrados. A falta de sequências intergênicas e elementos semelhantes a promotores sugere que esses genes fazem parte da mesma unidade de transcrição. Relatamos a purificação à homogeneidade do produto de entA, 2,3-diidro-2,3-diidroxibenzoato desidrogenase. É um octâmero de peso molecular nativo de 210.000; a sequência de aminoácidos amino-terminal confirmou a região codificante de entA. Nenhuma atividade de isocorisamato sintase foi associada a este polipeptídeo. Essa descoberta leva à conclusão de que a recente sugestão (M. S. Nahlik, T. P. Fleming e M. A. McIntosh, J. Bacteriol. 169:4163-4170, 1987) de que as atividades de 2,3-diidro-2,3-diidroxibenzoato desidrogenase e isocorisamato sintase residem em uma única enzima bifuncional de 26.000 daltons está incorreta, mesmo que as mutações de entA e entC mapeiem para o mesmo locos genético.