Ribozyme de Alquiltransferase para Alquilação Específica de N 4 -Citosina

RESUMO Riboenzimas para modificação específica de RNA fornecem uma abordagem elegante para a instalação de diversos grupos funcionais, fluoróforos, marcadores de afinidade ou cruzadores em posições definidas dentro de um RNA de interesse. Há um interesse crescente em expandir a caixa de ferramentas de riboenzimas, uma vez que as riboenzimas selecionadas in vitro recentemente relatadas foram, em sua maioria, limitadas à rotulagem em locais de adenosina, seja pela alquilação da nucleobase ou formação de fosfodiéster no grupo 2'-OH. Aqui relatamos uma ribozyme de alquiltransferase específica para citidina (CSAR) que utiliza O 6 -benzilguaninas como doadores de grupos alquilo. CSAR é a primeira ribozyme que catalisa a alquilação direta do grupo amino exocíclico de uma nucleobase e gera citidina N 4 -alquilada em um contexto de sequência definido de um curto laço de RNA em garça. Em combinação com o ajuste dos parâmetros eletrônicos do grupo benzil transferido, CSAR permite uma alquilação de citidina altamente eficiente para a instalação de grupos funcionais bioortogonais.