Identificando a estabilidade da polimerase em misturas mestre utilizadas em PCR e possibilidades de reparo para os reagentes degradados

O componente da mistura mestre comercial disponível que é mais sensível a condições desfavoráveis é uma polimerase. As misturas mestre de reação em cadeia da polimerase (PCR) disponíveis comercialmente são geralmente recomendadas para armazenamento a -20°C, caso contrário, podem perder a sua atividade. O objetivo do experimento foi verificar se armazenar as misturas em condições adversas e extremas poderia influenciar a qualidade do produto da PCR. Na segunda fase da pesquisa, o objetivo foi indicar se reagentes de PCR inativos que perderam sua atividade poderiam recuperar suas propriedades enzimáticas. Cinco misturas mestre comercialmente disponíveis foram incubadas em condições desfavoráveis. Após a PCR, foi realizada uma eletroforese e o produto obtido foi uma evidência de uma reação de PCR adequada. A degradação total das misturas foi causada por sua incubação à temperatura ambiente por 28 dias e incubação a 100°C por 60 minutos. A adição de polimerases às misturas degradadas (incubação à temperatura ambiente por 28 dias) resultou na regeneração de todas as cinco misturas. No caso das polimerases incubadas a 100°C por 60 minutos, a regeneração foi eficaz apenas em duas das cinco misturas. Nossa pesquisa confirma que a mistura mestre de PCR é caracterizada por alta resistência a condições variadas e, em alguns casos, pode ser reparada após a degradação.