Eletroforese bidimensional de proteínas em alta resolução.

Uma técnica foi desenvolvida para a separação de proteínas por eletroforese em gel de poliacrilamida bidimensional. Devido à sua resolução e sensibilidade, essa técnica é uma ferramenta poderosa para a análise e detecção de proteínas de fontes biológicas complexas. As proteínas são separadas de acordo com o ponto isoelétrico por focagem isoelétrica na primeira dimensão, e de acordo com o peso molecular por eletroforese em dodecil sulfato de sódio na segunda dimensão. Como esses dois parâmetros são não relacionados, é possível obter uma distribuição quase uniforme de manchas de proteínas em um gel bidimensional. Essa técnica resolveu 1100 componentes diferentes de Escherichia coli e deve ser capaz de resolver um máximo de 5000 proteínas. Uma proteína contendo tão pouco quanto uma desintegração por minuto de 14C ou 35S pode ser detectada por autoradiografia. Uma proteína que constitui de 10^-4 a 10^-5% da proteína total pode ser detectada e quantificada por autoradiografia. A reprodutibilidade da separação é suficiente para permitir que cada mancha em uma separação seja pareada com uma mancha em uma separação diferente. Essa técnica fornece um método para estimativa (nas sensibilidades descritas) do número de proteínas produzidas por qualquer sistema biológico. Esse sistema pode resolver proteínas que diferem em uma única carga e, consequentemente, pode ser utilizado na análise de modificações in vivo que resultam em uma alteração de carga. Proteínas cuja carga é alterada por mutações missense podem ser identificadas. Uma descrição detalhada dos métodos, bem como as características deste sistema, são apresentadas.