Mutagênese Direcionada Altamente Eficiente de Drosophila com o Sistema CRISPR/Cas9

Aqui, apresentamos um método simples e altamente eficiente para gerar e detectar mutações de qualquer gene em Drosophila melanogaster através do uso do sistema CRISPR/Cas9 (repetições palindrômicas agrupadas e regularmente espaçadas/sistema associado ao CRISPR). Mostramos que a injeção de RNA no embrião de Drosophila pode induzir mutagênese altamente eficiente de genes-alvo desejados em até 88% das moscas injetadas. Essas mutações podem ser transmitidas pela linha germinativa para criar linhagens estáveis. Nosso sistema fornece pelo menos uma melhoria de 10 vezes na eficiência em relação a relatos publicados anteriormente, permitindo uma aplicação mais ampla dessa técnica. Também descrevemos um método simples e altamente sensível de detecção de mutações no gene-alvo por análise de fusão de alta resolução e discutimos como a nova tecnologia possibilita o estudo da função gênica.