Métodos de Ativação Híbrida para Elucidação de Modificações em Ácidos Nucleicos

Técnicas híbridas de espectrometria de massa em tandem (MS/MS) que combinam transferência de elétrons (ET) e dissociação ativada por colisão (CAD), dissociação por multiphotonização infravermelha (IRMPD) ou fotodissociação ultravioleta (UVPD) foram implementadas e avaliadas para a caracterização de uma série de oligonucleotídeos e oligoribonucleotídeos, incluindo tanto cadeias simples nativas quanto cadeias simples contendo locais de modificação platinados, fosforotioados e 2'-O-metilados. ET-IRMPD e ET-UVPD de oligonucleotídeos e oligoribonucleotídeos resultaram em fragmentação rica em relação à produção de íons w, a, z e d para DNA, e c, y, w, a-B, d e z para RNA, com muitos íons produtos retendo a modificação e, assim, permitindo a identificação específica do local. ET-IRMPD causou uma dissociação secundária mais extensa dos íons, além de uma distribuição mais ampla de íons de sequência detectáveis atribuída ao uso de um limite de massa mais baixo. ET-UVPD promoveu caminhos de fragmentação de alta energia e criou os espectros MS/MS mais diversos. Os numerosos produtos gerados pelas técnicas híbridas de MS/MS resultaram em quebras específicas e extensas da espinha dorsal, permitindo que os locais de modificação de oligonucleotídeos multiplemente modificados fossem elucidados.