Propriedades Espectroscópicas e Cinéticas da Desidrogenase de Formato dependente de NAD+ contendo Molibdênio de Ralstonia eutropha

Examinamos a cinética rápida de reação e as propriedades espectroscópicas da desidrogenase de formato FdsABG dependente de NAD(+), contendo molibdênio, de Ralstonia eutropha. Confirmamos estudos anteriores em estado estacionário da enzima e estendemos sua caracterização a um estudo cinético rápido da meia-reação redutiva (a reação do formato com a enzima oxidada). Também caracterizamos o sinal de ressonância paramagnética eletrônica do centro de molibdênio em seu estado Mo(V) e demonstramos a transferência direta do hidrogênio do substrato Cα para o centro de molibdênio durante a reação. Variando a temperatura, a potência de micro-ondas e o nível de redução da enzima, conseguimos identificar claramente os sinais de ressonância paramagnética eletrônica para quatro dos clusters de ferro/enxofre da enzima e encontramos evidências sugestivas para dois outros; observamos uma interação magnética entre o centro de molibdênio e um dos centros de ferro/enxofre, permitindo a atribuição deste sinal a um cluster de ferro/enxofre específico na enzima. À luz dos recentes avanços em nossa compreensão da estrutura do centro de molibdênio, propomos um mecanismo de reação envolvendo a transferência direta de hidreto do formato para um grupo molibdênio-enxofre do centro de molibdênio.