Edição genética eficiente com CRISPR/Cas9 e baixos efeitos fora do alvo em zebrafish

As modificações genéticas em modelos animais foram grandemente facilitadas pela aplicação de ferramentas de edição genética direcionada. O sistema de edição genética CRISPR/Cas9 tipo II procariótico foi recentemente aplicado em linhas celulares e vertebrados. No entanto, ainda temos informações muito limitadas sobre a eficiência da mutagênese, taxas de transmissão da linha germinativa e efeitos fora do alvo nos genomas de organismos modelo. Agora demonstramos que a mutagênese CRISPR/Cas9 em zebrafish é altamente eficiente, alcançando até 86,0%, e é herdável. A eficiência do sistema CRISPR/Cas9 facilitou ainda mais a inserção direcionada de uma etiqueta de proteína fornecida por um oligonucleotídeo doador, com eficiências de inserção de 3,5-15,6%. As taxas de mutação em locais potenciais fora do alvo são de apenas 1,1-2,5%, demonstrando a especificidade do sistema CRISPR/Cas9. A facilidade e eficiência do sistema CRISPR/Cas9 com efeitos fora do alvo limitados o tornam uma poderosa ferramenta de engenharia genética para estudos in vivo.