A Família Connecdenn, Fatores de Troca de Nucleotídeos de Guaninina Rab35 Interagindo com a Maquinaria de Clatrina

Os Rabs constituem a maior família de GTPases monoméricas, porém para a maioria dos Rabs sabe-se relativamente pouco sobre sua ativação e recrutamento para as vias de tráfego vesicular. Recentemente identificamos a connecdenn (DENND1A), que contém um domínio DENN N-terminal (expresso de forma diferencial em células neoplásicas versus células normais), um módulo proteico comum e evolutivamente antigo. Através do seu domínio DENN, a connecdenn atua enzimaticamente como um fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) para Rab35. Aqui, identificamos dois membros adicionais da família connecdenn e demonstramos que todos os connecdenns atuam como GEFs para Rab35, embora com diferentes níveis de atividade. O domínio DENN de connecdenn 1 e 2 se liga a Rab35, enquanto connecdenn 3 não, indicando que a ligação e ativação de Rab35 são funções separáveis. Através de seus C terminais altamente divergentes, cada um dos connecdenns se liga à clatrina e ao adaptador de clatrina AP-2. Interessantemente, todos os três connecdenns utilizam mecanismos diferentes para se ligar ao AP-2. A caracterização de connecdenn 2 revela a ligação à região beta2-ear do AP-2 em um local que se sobrepõe ao utilizado pela proteína de hipercolesterolemia autossômica recessiva e pela betaarrestina, embora a sequência usada por connecdenn 2 seja única. A perda da função de connecdenn 2 através de interferência por RNA resultou em um aumento do tamanho dos endossomos iniciais, semelhante ao que é observado após a perda da atividade de Rab35. Nossos estudos revelam os domínios DENN de connecdenn como GEFs generalizados para Rab35 e identificam um novo motivo de ligação ao AP-2, demonstrando um vínculo complexo entre a maquinaria de clatrina e a ativação de Rab35.