Métodos eficientes de correção genômica em células iPS humanas usando o sistema CRISPR–Cas9

A correção precisa de genes usando o sistema CRISPR-Cas9 em células iPS humanas apresenta grande promessa para várias aplicações, como o estudo de funções de genes, modelagem de doenças e terapia gênica. Neste artigo de revisão, resumimos métodos para edição eficaz de sequências genômicas de células iPS com base em nossas experiências na correção de mutações no gene da distrofina com o sistema CRISPR-Cas9. Projetar sgRNAs específicos, bem como ter métodos de transfecção eficientes e ensaios de detecção adequados para avaliar as atividades de clivagem genômica, são críticos para a edição bem-sucedida do genoma em células iPS. Além disso, como as células iPS são frágeis por natureza quando dissociadas em células únicas, recomenda-se uma confirmação passo a passo durante o processo de recuperação celular para obter um número adequado de clones de células iPS editadas. Esperamos que as técnicas descritas aqui sejam úteis para pesquisadores de diversos campos que desejam realizar edição genômica em células iPS.