Efeitos da velocidade de dispensação para mergulho do camaleão na concentração de partículas, formação de complexos e resolução final: Um estudo de caso utilizando o complexo inativo da ribonucleotídeo redutase de Neisseria gonorrhoeae

A ribonucleotídeo redutase (RNR) é uma enzima essencial que converte ribonucleotídeos em desoxirribonucleotídeos e é uma alvo promissor para antibióticos, mas poucas RNRs foram caracterizadas estruturalmente. Apresentamos o uso do camaleão, um plunger de microscopia eletrônica criogênica piezoelétrica disponível comercialmente, para abordar a desnaturação de complexos na RNR classe Ia de Neisseria gonorrhoeae. Aqui, caracterizamos a extensão da desnaturação do complexo em forma de anel após a preparação da grade usando um plunger tradicional e usando um camaleão com tempos de dispensação para mergulho variáveis. Também caracterizamos como o tempo de dispensação para mergulho influencia a quantidade de amostra de proteína necessária para a preparação da grade e a orientação preferida da amostra. Demonstramos que o tempo de dispensação para mergulho mais rápido de 54 ms é suficiente para a geração de um conjunto de dados que produz uma estrutura de alta qualidade, e que uma técnica tradicional de mergulho ou tempos de dispensação para mergulho lentos do camaleão geram conjuntos de dados limitados em resolução pela desnaturação de complexos. A estrutura de resolução de 4.3 Å da RNR classe Ia de Neisseria gonorrhoeae no estado oligomérico inativo α4β4 resolvida usando o camaleão com um tempo de dispensação para mergulho rápido fornece informações moleculares sobre semelhanças e diferenças em relação à bem estudada RNR classe Ia α4β4 de Escherichia coli.