Contribuição de Mut ações Derivadas Clinicamente em ERG11 à Resistência a Azóis em Candida albicans

Em Candida albicans, o gene ERG11 codifica a lanosterol demetilase, o alvo dos antifúngicos azólicos. Mut ações em ERG11 que resultam em uma substituição de aminoácido alteram as capacidades dos azóis de se ligarem e inibirem Erg11, resultando em resistência. Embora mut ações em ERG11 tenham sido observadas em isolados clínicos, as contribuições específicas das mut ações individuais de ERG11 para resistência a azóis em C. albicans não foram amplamente exploradas. Sequenciamos ERG11 em 63 isolados clínicos resistentes ao fluconazol (FLC). Cinquenta e cinco isolados apresentavam pelo menos uma mut ação em ERG11, e observamos 26 posições distintas em que ocorreram substituições de aminoácidos. Mapeamos as 26 distintas posições variantes nesses alelos para quatro regiões na estrutura prevista para Erg11, incluindo seu sítio catalítico previsto, laço externo específico de fungos estendido, superfície proximal e região da superfície proximal para heme. No total, 31 alelos distintos de ERG11 foram recuperados, com 10 alelos de ERG11 contendo uma única substituição de aminoácido. Em seguida, caracterizamos 19 alelos distintos de ERG11 introduzindo-os na cepa C. albicans SC5314 suscetível aos azóis e testando-os quanto às susceptibilidades ao FLC, itraconazol (ITC) e voriconazol (VRC). As cepas que eram homozigotas para as substituições únicas de aminoácidos Y132F, K143R, F145L, S405F, D446E, G448E, F449V, G450E e G464S apresentaram um aumento ≥ 4 vezes na CIM de FLC. As cepas que eram homozigotas para várias substituições duplas de aminoácidos apresentaram diminuição nas susceptibilidades a azóis além das conferidas por qualquer única substituição de aminoácido. Esses achados indicam que mut ações em ERG11 são comuns entre isolados clínicos resistentes a azóis e que a maioria das mut ações resulta em mudanças apreciáveis nas susceptibilidades a FLC e VRC.