Dinâmica em estado estacionário de redes de filamentos intermediários.

Conduzimos experimentos para examinar a troca dinâmica entre subunidade e polímero de filamentos intermediários de vimentina (IF) em estado estacionário através do uso de vimentina marcada com xrhodamina na análise de recuperação de fluorescência após fotodisfarce (FRAP). A vimentina-xrhodamina foi incorporada na rede endógena de IF de vimentina após microinjeção em fibroblastos e pôde ser visualizada com uma câmera de dispositivo acoplado de carga (CCD) e microscopia de fluorescência por imagem digital. Regiões em forma de barra foram desbotadas na rede de IF fluorescente usando um feixe de um laser de íon de argônio e as células foram monitoradas em vários momentos após o desbotamento para avaliar a recuperação da fluorescência nas zonas desbotadas. Determinamos que fibras de vimentina desbotadas podem recuperar sua fluorescência em períodos de tempo relativamente curtos. Fibras de vimentina em células vivas também podem exibir movimentos significativos, mas a recuperação da fluorescência não dependia do movimento das fibras. A recuperação de fluorescência dentro de fibras individuais não apresentou nenhuma polaridade marcada e foi mais consistente com uma troca em estado estacionário de subunidades de vimentina ao longo dos comprimentos de IF.