Processamento e estabilidade das mutações do cotransportador de fosfato dependente de sódio tipo IIc em pacientes com raquitismo hipofosfatêmico hereditário com hipercalciúria

Mutações no cotransportador de fosfato (NaPi) dependente de Na(+), SLC34A3 (NaPi-IIc), são uma causa de raquitismo hipofosfatêmico hereditário com hipercalciúria (HHRH). Caracterizamos o impacto de várias mutações de HHRH no processamento e estabilidade do NaPi-IIc humano. As mutações S138F, G196R, R468W, R564C e c.228delC no NaPi-IIc humano diminuíram significativamente os níveis das atividades de cotransporte de NaPi em oócitos de Xenopus. Nas proteínas mutantes S138F e R564C, essa redução é resultado de uma diminuição na V(max) para P(i), mas não no K(m). As mutações G196R, R468W e c.228delC não foram localizadas nas membranas dos oócitos. Em células de rim de canguru (OK), a marcação da superfície celular, a imagem confocal microscópica e experimentos de pulso-perseguição mostraram que as mutações G196R e R468W resultaram na ausência de expressão na superfície celular devido à retenção no retículo endoplasmático (RE). Os mutantes G196R e R468W puderam ser parcialmente estabilizados por baixa temperatura. Na análise de eletroforese em gel de poliacrilamida nativa azul, os mutantes G196R e R468W estavam either desnaturados ou presentes em um complexo de agregação. Em contraste, os mutantes S138F e R564C foram trafegados para a superfície celular, mas degradados mais rapidamente do que a proteína WT. O mutante c.228delC não afetou a captação endógena de NaPi nas células OK. Assim, as mutações G196R e R468W causam retenção no RE, enquanto as mutações S138F e R564C estimulam a degradação do NaPi-IIc humano em células epiteliais renais. Juntas, esses dados sugerem que os mutantes de NaPi-IIc em HHRH mostram processamento e estabilidade defeituosos.