Purificação, caracterização e clonagem de cDNA de uma nova proteína solúvel de ligação a saxitoxina e tetrodotoxina do plasma do peixe-globo, Fugu pardalis

Algumas espécies de peixe-globo foram relatadas como possuindo tanto tetrodotoxina quanto saxitoxina, que compartilham um local de ligação em canais de sódio. Nós purificamos uma nova glicoproteína solúvel que se liga a essas toxinas do plasma do peixe-globo, Fugu pardalis, e nomeamos proteína de ligação a saxitoxina e tetrodotoxina do peixe-globo (PSTBP). A PSTBP apresentou uma capacidade de ligação de 10,6 +/- 0,97 nmol x mg(-1) de proteína e um K(d) de 14,6 +/- 0,33 nm para (3)Hsaxitoxina em ensaios de ligação em equilíbrio. A ligação da (3)HSaxitoxina (10 nm) a PSTBPs foi meio-inibida pela presença de tetrodotoxina e saxitoxina em 12 microm e 8,5 nm, respectivamente. A partir dos resultados da cromatografia de filtração em gel (200 kDa) e SDS/PAGE (104 kDa), sugeriu-se que a PSTBP consiste de dímeros ligados não covalentemente de uma única subunidade. A PSTBP foi completamente des-glicosilada pela glicopeptidase F, produzindo uma única banda em 42 kDa. Dois cDNAs altamente homólogos entre si codificando PSTBP (PSTBP1 e PSTBP2, com identidade prevista de aminoácidos de 93%), foram obtidos de uma biblioteca de cDNA do fígado de F. pardalis. Essas proteínas consistiram em dois domínios homólogos repetidos em tandem. As sequências de aminoácidos previstas de PSTBP1 e 2 não foram homólogas à de saxifilina, uma proteína de ligação a saxitoxina relatada, ou canais de sódio, mas suas sequências N-terminais eram homólogas à da proteína de ligação a tetrodotoxina relatada do plasma de Fugu niphobles, que não foi totalmente caracterizada. As sequências de cDNA parcialmente homólogas a PSTBP1 e 2 também foram encontradas em clones de tag de sequência expressa do fígado de linguados não tóxicos. Presumivelmente, a PSTBP está envolvida na acumulação e/ou excreção de toxinas em peixes-globo.