A Glicosilação da Eritropoietina Afeta a Cinética de Ligação ao Receptor: Papel das Interações Eletrostáticas

A eritropoietina (EPO) é uma citocina produzida pelo rim cuja função é estimular a produção de glóbulos vermelhos na medula óssea. Anteriormente, foi demonstrado que a afinidade da EPO por seu receptor, EPOR, está inversamente relacionada à sialilação do carboidrato da EPO. Para entender melhor as propriedades da EPO que modulam sua afinidade pelo receptor, várias glicoformas foram analisadas utilizando ressonância de superfície de plasmon. O sistema utilizado foi bem caracterizado e é baseado em relatórios anteriores que empregaram uma quimera EPOR-Fc capturada em uma superfície de Proteína A. Usando três variantes de EPO contendo diferentes níveis de sialilação, determinamos que o ácido siálico diminuiu a constante da taxa de associação (k(on)) em cerca de 3 vezes. Além disso, a EPO glicosilada apresentou um k(on) 20 vezes mais lento do que a EPO não glicosilada, indicando que o carboidrato central também impactou negativamente o k(on). O efeito das forças eletrostáticas na ligação da EPO foi estudado medindo a cinética de ligação em diferentes concentrações de NaCl. O aumento da concentração de NaCl resultou em um k(on) mais lento, enquanto teve pouco impacto no k(off), sugerindo que interações eletrostáticas de longo alcance são primariamente importantes na determinação da taxa de associação entre EPO e EPOR. Além disso, o conteúdo de glicosilação (ou seja, não glicosilada vs glicosilada, sialilada vs dessialilada) afetou as sensibilidades gerais de k(on) ao NaCl, indicando que o ácido siálico e o glicano em si impactam o efeito geral dessas forças eletrostáticas.