Determinação de Proteínas Sericas por Meio da Reação de Biureto

Durante uma investigação das mudanças bioquímicas seguintes a lesão hepática experimental, sentimos a necessidade de um método simples, rápido e preciso para determinar as frações proteicas em pequenas quantidades de soro. Entre os procedimentos mais simples conhecidos, a reação de biureto parecia oferecer as possibilidades mais encorajadoras. Variações e melhorias na aplicação da reação de biureto à química clínica podem ser rastreadas nos trabalhos de Autenrieth (l), Hiller (2), Fine (3), Kingsley (4) e Robinson e Hogden (5). Kingsley (6) simplificou a técnica adicionando o soro diretamente a um reagente “de uma peça”. Esforços foram feitos para aumentar a estabilidade de tais reagentes de biureto com etileno glicol (7), tartrato (8) e citrato (9). Iniciamos nossa investigação com o método de Kingsley (6) e relatamos brevemente as duas principais dificuldades encontradas em seu uso. A primeira é que o reagente de proteína total (TP) e, em menor grau, o reagente de albumina (ALB) não são suficientemente estáveis. O tempo que permanecem assim depende da técnica de sua preparação. Uma consequência dessa estabilidade variável é a dificuldade em duplicar curvas de calibração com diferentes lotes de reagente. Erros podem surgir quando resultados com um novo reagente são lidos a partir de uma curva de calibração antiga. Erros sérios ocorrem se um reagente é usado após a separação de qualquer depósito negro que evidencie deterioração. Uma segunda dificuldade tem sido que as estimativas de proteína total feitas com o reagente TP e lidas, conforme prescrito, a partir de curvas de calibração preparadas com o reagente ALB tendem a ser muito baixas. Registrados na Tabela I estão os resultados de uma série de análises nas quais o procedimento de biureto de Kingsley foi comparado com o método de Kjeldahl2 tanto em análises normais quanto em ab-.