Isolamento de Células Mononucleares Totais de Sangue Periférico e Sangue do Cordão Umbilical

O sangue periférico é a principal fonte de células linfoides para investigação do sistema imunológico humano. Seu uso é facilitado pela centrifugação em gradiente de densidade de Ficoll-Hypaque - um método simples e rápido de purificação de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) que aproveita as diferenças de densidade entre células mononucleares e outros elementos encontrados na amostra de sangue. Assim, as células são distribuídas na solução em camadas com base nas diferenças de densidade/tamanho. Métodos adicionais de purificação podem ser empregados, uma vez que a amostra de células mononucleares pode ser purificada de monócitos por adesão ou pela exposição ao éster metílico da L-leucina; esses métodos são descritos para ambos os procedimentos. O sangue do cordão umbilical e o sangue periférico de recém-nascidos contêm células imaturas, incluindo células vermelhas nucleadas, o que pode resultar em significativa contaminação da camada de células mononucleares, e a remoção dessas células requer etapas adicionais que são descritas. Os procedimentos de isolamento apresentados aqui também podem ser aplicados a populações celulares derivadas de tecidos.