O Gene DCC: Análise Estrutural e Mutações em Carcinomas Colorretais

DCC é um gene candidato a supressor tumoral que codifica uma proteína com similaridade de sequência a moléculas de adesão celular, como a N-CAM. Um conjunto de clones YAC sobrepostos que contém toda a região codificadora do DCC foi isolado. Estudos deste contíguo YAC mostraram que o gene DCC abrange aproximadamente 1,4 Mb. Para elucidação da estrutura exon-intrão, clones de fago lambda contendo todas as sequências codificadoras conhecidas foram isolados de uma biblioteca genômica. Esses clones foram utilizados para demonstrar a existência de 29 exons do DCC, e as sequências das fronteiras exon-intrão foram determinadas para cada um. Vinte e três marcadores polimórficos do cromossomo 18 foram então estudados em um painel de tumores colorretais primários que haviam perdido alguns, mas não todos, os cromossomos 18. Na maioria desses tumores, a região que foi perdida incluía o DCC. Por fim, abordagens de Southern blot e PCR foram utilizadas para buscar mutações sutis em vários exons do DCC. Um tumor que tinha uma mutação pontual no exon 28 foi encontrado, resultando em uma substituição de prolina por histidina. Um segundo tumor com uma mutação pontual no intron 13 também foi encontrado. O mapa regional e a estrutura genômica do DCC devem fornecer os meios para estudar de forma mais extensa as alterações do gene DCC e a função da proteína em células normais e neoplásicas.