Ensaios de redução de resazurina para triagem de compostos anti-tuberculosos contra Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis BCG e Mycobacterium smegmatis em estado dormente e em crescimento ativo

OBJETIVOS: Desenvolver ensaios simples, rápidos, de baixo custo e robustos para triagem de medicamentos contra micobactérias dormentes e em crescimento ativo. MÉTODOS: Culturas ativamente crescentes aeróbicas e adaptadas à hipoxia de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis BCG e Mycobacterium smegmatis foram testadas quanto à suscetibilidade a medicamentos antimicrobianos padrão pelo ensaio de redução de resazurina. As CIMs visuais e fluorimétricas foram comparadas com as obtidas pelo ensaio padrão de unidades formadoras de colônias (cfu). RESULTADOS: As CIMs de medicamentos para M. tuberculosis e M. bovis BCG foram determinadas pelo ensaio de microplaca aerobicamente de resazurina (REMA) e correlacionaram-se bem com as obtidas pelo ensaio de cfu. Metronidazol e nitrofurano mostraram atividade bactericida comparável no ensaio de redução de resazurina hipóxica (HyRRA). O ensaio HyRRA foi considerado superior ao ensaio de cfu, pois distinguiu entre bactérias dormentes metabolicamente ativas e organismos não viáveis, ao contrário do ensaio de cfu que não conseguia diferenciar entre essas duas populações. O ensaio HyRRA apresentou boa concordância tanto nos formatos fluorimétrico quanto visual para distinguir entre efeitos bactericidas e bacteriostáticos de um medicamento. CONCLUSÕES: Os ensaios REMA e HyRRA serão úteis para triagem de compostos anti-dormência anti-tuberculosa e teste de suscetibilidade a medicamentos de maneira segura, confiável, fácil e econômica, particularmente em países com poucos recursos. A aplicação dos ensaios em M. smegmatis ou M. bovis BCG oferece a vantagem distinta de triagem rápida e segura de compostos anti-tuberculosos em um formato de alto rendimento.