A Idade do Inóculo Influencia Fortemente a Frequência de Persistentes e Pode Mascarar Efeitos de Mutações Implicadas na Persistência Alterada

A maioria das células transferidas de culturas em fase estacionária para meio fresco retoma o crescimento rapidamente, enquanto algumas permanecem em um estado não proliferativo por mais tempo. Essas bactérias temporariamente não proliferantes são tolerantes a vários antibióticos bactericidas e constituem uma fonte principal de persistentes. Vários genes foram mostrados como influentes na frequência de persistentes em Escherichia coli, embora o mecanismo exato subjacente à formação de persistentes seja desconhecido. Este estudo demonstra que a frequência de persistentes é altamente dependente da idade do inóculo e do meio em que foi cultivado. O mutante hipA7 apresentou 1.000 vezes mais persistentes do que o tipo selvagem quando os inóculos foram amostrados de culturas estacionárias mais jovens. Quando iniciadas após uma longa fase estacionária, os dois exibiram frequências de persistentes iguais e elevadas. As frequências de persistentes mais baixas das cepas knockout glpD, dnaJ e surA aumentaram para o nível do tipo selvagem quando os inóculos envelheceram. As deleções mqsR e phoU mostraram níveis de persistentes diminuídos apenas quando os inóculos eram de culturas envelhecidas, enquanto as deleções sucB e ygfA apresentaram níveis de persistentes diminuídos independentemente da idade dos inóculos. Uma dependência das condições de cultura reforça a noção de que, durante a triagem de mutantes com frequências de persistentes alteradas, os detalhes experimentais exatos são de grande importância. Ao contrário da ampicilina e da norfloxacina, que sempre deixam uma fração de bactérias vivas, a amikacina matou todas as células no experimento de retomada de crescimento. Concluiu-se que a frequência de persistentes depende das condições de cultivo do inóculo, particularmente sua idade, e da escolha do antibiótico.