Quantificação da proteína ácida fibrilar glial no sangue usando um ensaio microfluídico de segunda geração. Validação e análise comparativa com dois ensaios estabelecidos

OBJETIVOS: Níveis aumentados de proteína ácida fibrilar glial (GFAP) no sangue foram identificados como um biomarcador valioso para algumas doenças neurológicas, como a doença de Alzheimer e esclerose múltipla. No entanto, a maioria das quantificações de GFAP no sangue realizadas até agora foi feita usando o mesmo ensaio baseado em esferas, e até o momento falta uma aplicação clínica rotineira. MÉTODOS: Neste estudo, validamos um novo ensaio Ella de segunda geração (2ª geração) para quantificar GFAP no soro. Além disso, comparamos seu desempenho com um array de moléculas únicas baseado em esferas (Simoa) e um ensaio de GFAP caseiro em uma coorte clínica de doenças neurológicas, incluindo 210 pacientes. RESULTADOS: Os experimentos de validação resultaram em uma variação intraensaio de 10%, interensaio de 12%, um limite de detecção de 0,9 pg/mL, um limite inferior de quantificação de 2,8 pg/mL, e menos de 20% de variação em amostras de soro expostas a até cinco ciclos de congelamento-descongelamento, 120 h a 4 °C e à temperatura ambiente. A medição da coorte clínica usando todos os ensaios revelou o mesmo padrão de distribuição de GFAP nos diferentes grupos diagnósticos. Além disso, observamos uma forte correlação entre o Ella de 2ª geração e Simoa (r=0,91 (IC 95%: 0,88-0,93), p<0,0001) e o ensaio imunológico caseiro (r=0,77 (IC 95%: 0,70-0,82), p<0,0001). CONCLUSÕES: Nossos resultados demonstram uma alta confiabilidade, precisão e reprodutibilidade do ensaio Ella de 2ª geração. Embora uma maior sensibilidade do ensaio para Simoa tenha sido observada, o novo ensaio microfluídico pode ter o potencial de ser usado para análise de GFAP em trabalhos clínicos diários devido à sua robustez e facilidade de uso.