Ligação do Peptidoglicano Bacteriano ao CD14

A hipótese de que o peptidoglicano solúvel (sPGN, um ativador de macrófagos de bactérias Gram-positivas) se liga ao CD14 (um receptor de lipopolissacarídeos (LPS)) foi testada. O sPGN ligou-se especificamente ao CD14 nas seguintes três análises: ligação do CD14 solúvel 32P-CD14 (sCD14) ao sPGN imobilizado em agarose, ensaio imunoenzimático ligado a enzima e ligação cruzada por fotoafinidade. O sCD14 também se ligou especificamente ao dipeptídeo murâmico imobilizado em agarose ou ao dipeptídeo murâmico GlcNAc, mas não ao pentapeptídeo PGN. A ligação do sCD14 a ambos sPGN e ReLPS (onde ReLPS é LPS de Salmonella minnesota Re 595) foi inibida competitivamente por sCD14 não rotulado, fragmento N-terminal 1-152 de sCD14, sPGN, LPS suave, ReLPS, lipídio A e ácido lipoteicoico, mas não por dextrano, sulfato de dextrano, heparina, ácido teicoico ribitol ou fragmentos de PGN solúveis de baixo peso molecular. A ligação do sCD14 ao sPGN foi mais lenta do que ao ReLPS, mas com maior afinidade (KD = 25 nM versus 41 nM). A proteína ligante de LPS (LBP) aumentou a ligação do sCD14 ao sPGN adicionando outro KD de menor afinidade e outro Bmax mais alto, mas para o ReLPS, a LBP aumentou a afinidade de ligação gerando dois KD com afinidade significativamente maior (7,1 e 27 nM). A LBP também aumentou a inibição da ligação do sCD14 pelo LPS, ReLPS e lipídio A. A ligação do sCD14 a ambos sPGN e ReLPS foi inibida pelo anticorpo monoclonal anti-CD14 MEM-18, mas outros anticorpos monoclonais anti-CD14 mostraram inibição diferencial, sugerindo locais de ligação conformacionais no CD14 para sPGN e LPS, que são parcialmente idênticos e parcialmente diferentes.