Integrando Duas Reações de Ligação Bioortogonais Eficientes e Específicas com Incorporação Metabólica Natural em Uma Célula para Marcação Dupla de Vírus

Embora técnicas em química bioortogonal e incorporação metabólica tenham sido desenvolvidas na última década, ainda é difícil integrar diferentes reações bioortogonais ou incorporações metabólicas em um único sistema. Neste relatório, as incorporações metabólicas de proteínas e DNA foram combinadas com duas reações bioortogonais em uma célula para desenvolver um método fácil e universal para marcação dupla de vírus. Grupos azida e vinila foram introduzidos nas proteínas ou genomas dos vírus, respectivamente, através da biossíntese intrínseca de biomoléculas, que foram posteriormente marcadas fluorescentemente através de química de clique livre de cobre ou reações de ligação alcona-tetrazina durante o processo de propagação natural em células hospedeiras. Tanto os vírus envolventes quanto os vírus capsidais podiam ser marcados, e a eficiência de marcação dupla foi superior a 80%. Os vírions progenitores marcados estavam estruturalmente intactos e completamente infecciosos, e sua fluorescência era forte o suficiente para rastrear vírions individuais.