Um Polimorfismo His-155 para Tyr Confere Ganho de Função ao Receptor Humano P2X7 de Linfócitos Leucêmicos Humanos

O P2X(7)R é um canal de cátions regulado por ATP expresso em células hemopoiéticas que participa tanto da proliferação celular quanto da apoptose. A expressão e a função do P2X(7)R têm sido associadas ao curso clínico de pacientes afetados por leucemia linfocitária crônica (LLC). Variantes funcionais que causam perda de função do P2X(7)R foram identificadas, a saber, os polimorfismos 1513A>C (E496A), 1729T>A (I568N) e 946G>A (R307Q). Aqui, investigamos outros polimorfismos não sinônimos localizados na porção extracelular do receptor, como a variante 489C>T (H155Y), ou na longa cauda citoplasmática do receptor, como as variantes 1068G>A (A348T), 1096C>G (T357S) e 1405A>G (Q460R). A função do P2X(7)R foi monitorada medindo-se a entrada de Ca(2+) induzida por ATP em PBL de pacientes afetados por LLC e em células renais embrionárias humanas (HEK) 293 transfectadas estavelmente com cada variante alélica P2X(7) única. A entrada de Ca(2+) foi significativamente reduzida em associação com o alelo 1513C, enquanto variantes localizadas no mesmo domínio intracelular, como as variantes 1068A, 1096G ou 1405G, estavam associadas a uma diminuição funcional menor. Um aumento significativo no fluxo de Ca(2+) foi observado em linfócitos de pacientes com LLC portadores dos genótipos 489C/T e 489T/T em associação com o genótipo 1513A/A. A análise funcional em células HEK293 recombinantes expressando P2X(7)R confirmou uma ativação dependente de ATP aumentada do mutante P2X(7) 489T em relação ao receptor tipo selvagem, conforme avaliado tanto por entrada de Ca(2+)(i) quanto por experimentos de captação de etídio. Esses dados identificam 489C>T como um polimorfismo de ganho de função do P2X(7)R.