A parte amino-terminal da ActA é crítica para a motilidade baseada em actina de Listeria monocytogenes; a região central rica em prolina age como um estimulador

O patógeno bacteriano intracelular Listeria monocytogenes se move dentro do citoplasma da célula hospedeira impulsionado pela montagem contínua de actina em um polo da bactéria. Esse processo requer a expressão da proteína de superfície bacteriana ActA. Recentemente, para identificar as regiões da ActA que são necessárias para a montagem de actina, nós e outros expressamos diferentes domínios da ActA por transfectação em células eucarióticas. Como esse tipo de abordagem não pode abordar o papel da ActA na propulsão bacteriana impulsionada por actina, agora geramos várias cepas de L. monocytogenes expressando diferentes domínios da ActA e analisamos a capacidade dos diferentes domínios de desencadear a montagem de actina e o movimento bacteriano tanto em células infectadas quanto em extratos citoplasmáticos. Mostramos aqui que a parte amino-terminal é crítica para a montagem e movimento de F-actina. Os repetições internas ricas em prolina e os domínios carboxi-terminais não são essenciais. No entanto, ensaios de motilidade in vitro demonstraram que mutantes que carecem do domínio de repetições ricas em prolina da ActA se moveram duas vezes mais devagar (6 +/- 2 micrômetros min(-1)) do que o tipo selvagem (13 +/- 3 micrômetros min(-1)). Além disso, o tratamento com fosfatase de extratos de proteínas de células infectadas com as cepas de L. monocytogenes que expressam as variantes da ActA sugeriu que a fosforilação pode não ser essencial para a atividade da ActA.