A organização molecular da miosina em fibras de estresse de células cultivadas.

Anticorpos contra miosina de moela de frango, subfragmento 1, cadeia leve 20 e meromiosina leve foram utilizados para visualizar a miosina em fibras de estresse de células de frango cultivadas. A especificidade dos anticorpos foi testada em proteínas purificadas da moela e lisados totais de células utilizando coloração imunocoloidal de prata em blot de proteínas. A imunofluorescência em fibroblastos e células epiteliais de frango cultivadas exibiu um padrão de coloração semelhante de anticorpos contra miosina total, subfragmento 1 e cadeia leve 20, enquanto os anticorpos contra meromiosina leve mostraram uma reação substancialmente diferente. A distribuição dos anticorpos foi investigada utilizando o método de coloração imunocoloidal de prata indireta e direta em células permeabilizadas e fixadas. A abordagem indireta nos permitiu descrever a distribuição geral da miosina em fibras de estresse. A coloração imunocoloidal de prata dupla direta, no entanto, forneceu informações mais detalhadas sobre a orientação das moléculas de miosina e sua localização em relação à alfa-actinina: a alfa-actinina, identificada com anticorpos acoplados a ouro de 10 nm, foi concentrada nos corpos densos ou faixas eletrondensas das fibras de estresse, enquanto a miosina estava confinada às regiões eletrófilas intermediárias. Dependendo dos anticorpos utilizados em combinação com alfa-actinina, as regiões intermediárias revelaram um padrão de coloração diferente: anticorpos contra miosina (reativos com a porção da cabeça da miosina não muscular) e contra cadeia leve 20 (ambos acoplados a ouro de 5 nm) marcaram duas bandas opostas adjacentes à alfa-actinina, e anticorpos contra meromiosina leve (acoplados a ouro de 5 nm) marcaram uma única zona central. Com base nesses resultados, concluímos que a miosina em fibras de estresse está organizada em filamentos bipolares.