Análise de Partícula Única em Alta Resolução a Partir de Imagens de Crio-Microscopia Eletrônica Usando SPHIRE

SPHIRE (SPARX para Microscopia Eletrônica em Alta Resolução) é um novo software open-source, fácil de usar, para o processamento semiautomatizado de dados de crio-microscopia eletrônica de partícula única (crio-EM). O protocolo apresentado aqui descreve em detalhes como obter uma estrutura em resolução quase atômica a partir de filmes de micrografias de crio-EM, guiando os usuários por todas as etapas do pipeline de determinação da estrutura de partícula única. Essas etapas são controladas pela nova interface gráfica do usuário do SPHIRE e exigem mínima intervenção do usuário. Usando este protocolo, uma estrutura de 3,5 Å do TcdA1, um complexo de toxina Tc do Photorhabdus luminescens, foi derivada a partir de apenas 9500 partículas únicas. Esta abordagem simplificada ajudará novos usuários sem experiência extensiva em processamento e informações estruturais a priori, a obter modelos atômicos livres de ruído e imparciais de seus complexos macromoleculares purificados em seu estado nativo.