Análise do papel funcional do domínio chromo de Polycomb em Drosophila melanogaster.

O domínio chromo foi identificado como um motivo proteico homólogo entre Polycomb (Pc) - um membro dos genes do grupo Pc que codificam repressores transcricionais dos genes homeóticos - e HP1 - uma proteína associada à heterocromatina codificada pelo gene supressor do efeito de variação de posição Su(var)205. Juntamente com estudos genéticos anteriores, essa similaridade molecular suporta a sugestão de um mecanismo comum utilizado para gerar heterocromatina e para reprimir genes homeóticos. A conservação evolutiva do domínio chromo em todo o reino animal e vegetal implica um papel funcional importante para esse motivo proteico. Utilizamos linhagens transgênicas, bem como ensaios de expressão transitória, empregando células de cultura de tecidos de Drosophila para estudar o papel funcional do domínio chromo de Pc. A proteína Pc do tipo selvagem é expressa endogenamente em células SL2 e é encontrada em grandes complexos imunologicamente visíveis. Proteínas Pc mutadas foram expressas como proteínas de fusão com Pc-beta-galactosidase, e sua distribuição nuclear foi examinada por imunofluorescência indireta em células de cultura de tecidos e em cromossomos polietênicos de larvas transgênicas. Mostramos que as truncações carboxilo-terminais da proteína Pc não afetam a ligação cromossômica da proteína de fusão. No entanto, mutações que afetam apenas o domínio chromo, incluindo deleções geradas in vitro, bem como mutações pontuais, abolem a ligação cromossômica. Nossos resultados demonstram pela primeira vez que o domínio chromo é importante para a função de Pc e que é absolutamente necessário para a ligação da proteína Pc à cromatina. Alguns dos padrões nucleares gerados pelas formas mutadas das proteínas de fusão sugerem, além disso, que o domínio chromo poderia estar envolvido em um mecanismo de empacotamento, essencial para compactar proteínas cromossômicas dentro de heterocromatina ou complexos semelhantes à heterocromatina.