April 27, 1999Proceedings of the National Academy of Sciences332 citationsOpen Access
Estrain de reporter aprimorado para monitorar excisões de DNA mediadas por Cre recombinase em camundongos
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Key Points
- Esta pesquisa tem como objetivo criar uma melhor linhagem de reporter para monitorar excisões de DNA mediadas por Cre em camundongos, aprimorando estudos de modificação genética.
- Desenvolvemos um gene de fusão beta-galactosidase-fosfatase de neomicina modificado no locus ROSA26.
- Examinamos a expressão da linhagem de reporter modificada em embriões e camundongos adultos.
- Cruzamos a linhagem de reporter com camundongos transgênicos que expressam Cre para avaliar a acessibilidade ao Cre.
- A linhagem de reporter demonstrou expressão ubíqua de betageo após a excisão mediada por Cre.
- Os alelos ROSA26 flankados por loxP foram acessíveis ao Cre durante a embriogênese precoce.
- Expressão específica foi observada em linfócitos T, confirmando o potencial de modificação gênica direcionada.
Abstract
O uso eficaz da modificação genética condicional por Cre recombinase-loxP requer linhagens de camundongos que expressem Cre com padrões definidos de expressão. Para avaliar a funcionalidade in vivo de camundongos que expressam Cre, projetamos uma linhagem de reporter aprimorada para monitorar excisões mediadas por Cre. O gene de fusão beta-galactosidase-fosfatase de neomicina (betageo) aprisionado no locus ROSA26 foi modificado por direcionamento gênico, de modo que betageo é expresso apenas após a excisão mediada por Cre de sequências de DNA flankadas por loxP. Betageo do alelo ROSA26 excisado é expresso de forma ubíqua em embriões e camundongos adultos. Ao cruzar a linhagem de reporter com camundongos transgênicos que expressam Cre, demonstramos que o alelo ROSA26 flankado por loxP é acessível a Cre durante os primeiros estágios da embriogênese, assim como em uma linhagem hematopoiética específica (linfócitos T). Essa linhagem de reporter aprimorada deve facilitar o monitoramento in vivo de eventos de excisão mediada por Cre em uma variedade de contextos experimentais.