Detecção de doenças genéticas e amplificação de DNA usando ligase termostável clonada.

A reação em cadeia da polimerase, utilizando polimerase de DNA termostável, revolucionou os diagnósticos de DNA. Outra enzima termostável, a ligase de DNA, é utilizada no ensaio reportado aqui, que amplifica DNA e discrimina uma substituição de base única. Esta enzima clonada liga especificamente dois oligonucleotídeos adjacentes quando hybridizados a 65 graus C a um alvo complementar, apenas quando os nucleotídeos estão perfeitamente pareados na junção. Os produtos de oligonucleotídeos são amplificados exponencialmente pelo ciclagem térmica da reação de ligadura na presença de um segundo conjunto de oligonucleotídeos adjacentes, complementares ao primeiro conjunto e ao alvo. Um erro de base única impede a ligadura/amplificação e é assim distinguido. Este método foi explorado para detectar 200 moléculas-alvo, bem como para discriminar entre genótipos normais de globina beta A- e beta S- falciforme a partir de amostras de sangue de 10 microlitros.