Junctions de integração de vetores de vírus adeno-associado

Vetores derivados de vírus adeno-associado (AAV) têm o potencial de transduzir células de mamíferos de forma estável ao se integrar nos cromossomos do hospedeiro. Apesar da pesquisa ativa sobre o uso de vetores AAV para terapia gênica, a estrutura dos provírus vetoriais integrados não foi previamente analisada no nível de sequência de DNA. Estudos sobre a integração do AAV selvagem identificaram um locus comum de integração específico de local no cromossomo humano 19; no entanto, a maioria dos vetores AAV não parece integrar-se nesse locus. Para melhorar nossa compreensão da integração do vetor AAV, analisamos as sequências de DNA de vários provírus vetoriais integrados. Células HeLa foram transduzidas com um vetor de manuseio AAV, e provírus integrados contendo DNA humano flanqueador foram recuperados como plasmídeos bacterianos para análise posterior. Descobrimos que vetores AAV se integraram como provírus de cópia única em locais cromossômicos aleatórios e que o DNA flanqueador HeLa nos locais de integração não era homólogo ao AAV ou ao locus de integração específico de local do AAV selvagem. As junções de recombinação estavam espalhadas por todo o vetor de repetições terminais, sem especificidade aparente de local. Nenhum dos vetores integrados estava completamente intacto. Provírus vetoriais com repetições terminais quase intactas foram excisados e amplificados após infecção com AAV selvagem e adenovírus. Nossos resultados sugerem que vetores AAV se integram por recombinação não homóloga após degradação parcial dos genomas de vetores que entram. Esses achados têm implicações importantes para o mecanismo de integração do vetor AAV e o uso desses vetores na terapia gênica humana.