Metilação de novo, expressão e infectividade de genomas retrovirais introduzidos em células de carcinoma embrionário.

Investigamos o bloqueio à expressão do vírus da leucemia murina de Moloney em células de carcinoma embrionário murino (EC). Células EC infectadas apresentaram até 100 genomas provirais integrados. No entanto, a expressão do vírus, medida pela formação de placas XC e síntese de RNA específico do vírus, não ocorreu em níveis significativos, em contraste com células diferenciadas infectadas de forma produtiva. A análise do DNA nas células EC infectadas revelou que os genomas provirais estavam altamente metilados, conforme demonstrado pela resistência à clivagem pelo Sma I. Genomas provirais integrados em células diferenciadas infectadas eram facilmente cortados pelo Sma I e, portanto, não estavam metilados nesses locais. A transfecção de DNA de células EC infectadas para células permissivas à expressão viral não conseguiu induzir a expressão do vírus. Contudo, os genomas provirais eram potencialmente infecciosos porque induziram placas XC quando as células receptoras para transfecção foram tratadas com 5-azacitidina. Acredita-se que este fármaco interfira na metilação do DNA. Concluímos que a expressão de genomas provirais introduzidos em células EC é suprimida e que essa inativação pode ser correlacionada com a metilação de novo do DNA viral. A atividade de metilação de novo pode, portanto, ser uma característica de células embrionárias precoces.