FlgD é uma proteína de suporte necessária para a montagem do gancho flagelar em Salmonella typhimurium

FlgD é conhecido por ser absolutamente necessário para a montagem do gancho, no entanto, não foi detectado no flagelo maduro. Nós superproduzimos e purificamos FlgD e levantamos um anticorpo contra ele. Usando esse anticorpo, detectamos FlgD em quantidades substanciais em corpos basais isolados de mutantes flgA, flgE, flgH, flgI, flgK e fliK, em quantidades muito menores nos do tipo selvagem e nos mutantes flgL, fliA, fliC, fliD e fliE, e não de modo algum nos de mutantes flgB, flgD, flgG e flgJ. Em termos do caminho de montagem morfológica, esses resultados indicam que FlgD é adicionado primeiro à estrutura quando a haste é completada e é descartado quando o gancho, tendo atingido seu comprimento maduro, recebe a primeira das proteínas de junção do gancho-filamento, FlgK, adicionada à sua ponta. A microscopia eletrônica de imunotransmissão estabeleceu que FlgD inicialmente está localizado na extremidade distal da haste e eventualmente está localizado na extremidade distal do gancho. Assim, parece agir como uma proteína que capta o gancho para permitir a montagem de subunidades de proteína do gancho, assim como outra proteína flagelar, FliD, faz para as subunidades de flagelina do filamento. No entanto, enquanto FliD está associado à ponta do filamento indefinidamente, FlgD está associado apenas transitoriamente à ponta do gancho; ou seja, atua como uma proteína de suporte. Quando FlgD foi adicionado ao meio de cultura de um mutante flgD, as células ganharam motilidade; assim, embora a tampa do gancho normalmente seja adicionada endogenamente, ela pode ser adicionada exogenamente. Quando os meios de cultura foram analisados em busca da presença da proteína do gancho, esta foi encontrada apenas no mutante flgD e, em menores quantidades, no mutante fliK (poligancho). Assim, embora FlgD seja necessário para a montagem da proteína do gancho, não é necessário para sua exportação.