Isolamento e caracterização de uma enzima de inserção de guanina, uma transglicosilase de tRNA específica, de Escherichia coli.

Uma enzima de inserção de guanina (transglicosilase de tRNA) foi purificada para um estado homogêneo a partir de Escherichia coli B por fracionamento com sulfato de amônio e cromatografias em colunas de DEAE-celulose, DEAE-Sephadex A-50, fosfocelulose e Sephadex G-200. O peso molecular da enzima, que parecia ser um único polipeptídeo, foi 4.6 X 10(4) pela eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio. A enzima catalisa a troca de guanina com a guanina localizada na primeira posição do anticódon de tRNATyr, tRNAHis, tRNAAsn e tRNAAsp, mas ao contrário das enzimas isoladas de reticulócitos de coelho e células tumorais de ascite de Ehrlich, não catalisa a troca de guanina com queuína (7-(3,4-trans-4,5-cis-dihidroxido-1-ciclopenten-3-ileminomethyl)-7-deazaguanina) presente nesses tRNAs. O pH ótimo da reação foi 7.0, e o valor de pH1 foi de 4.6 a 4.8. A reação exigiu íons Mg2+. 7-Metilguanina inibiu a inserção de guanina, mas os outros análogos de purina testados não foram inibitórios e não puderam substituir a guanina.