Dissociação do complexo do subfragmento 1 da actina por adenil-5'-il imidodifosfato, ADP e PPi.

A capacidade do adenil-5'-il imidodifosfato (AMP-PNP), ADP e PPi de dissociar o complexo de subfragmento 1 (S-1) da actina.miosina foi estudada usando uma ultracentrífuga analítica com ótica UV, que possibilitou a determinação direta do S-1 dissociado. A mu = 0,22 M, pH 7,0, 22 graus C, com nucleotídeo saturante presente, o ADP enfraquece a ligação do S-1 à actina em cerca de 40 vezes (K congruente a 10(5) M-1), enquanto tanto o AMP-PNP quanto o PPi enfraquecem a ligação em cerca de 400 vezes (K congruente a 10(4) M-1). Esse efeito de dissociação 10 vezes mais forte do AMP-PNP e do PPi em comparação com o ADP correlaciona-se com nossos dados mostrando que a ligação do AMP-PNP e do PPi ao S-1 é aproximadamente 10 vezes mais forte do que a ligação do ADP. Em contraste, as constantes de ligação do ADP, AMP-PNP e PPi ao acto.S-1 são quase idênticas (K congruente a 5 x 10(3) M-1). A 4 graus C, o AMP-PNP tem apenas um efeito de dissociação 3 vezes mais forte do que o ADP e, da mesma forma, nossos dados sugerem que a ligação do AMP-PNP e do ADP ao S-1 é bastante semelhante a 4 graus C. Portanto, o AMP-PNP e o PPi são, de fato, agentes de dissociação um pouco melhores do que o ADP, mas a diferença entre esses três ligantes é bastante pequena. Esses dados também mostram que a actina e o nucleotídeo se ligam a locais separados, mas interativos, no S-1 e que as moléculas de S-1 se ligam de forma independente ao longo do filamento de F-actina com uma constante de ligação de cerca de 1 x 10(7) M-1 a 22 graus C e força iônica fisiológica.