Clonagem de cDNAs de Comprimento Total Selecionados por Cap-Trapper Usando o Método de Ligações com Conectores de Cadeia Simples

Desenvolvemos o método de ligação com conector de cadeia simples (SSLLM), que utiliza ligase de DNA para adicionar um conector dsDNA a cDNA de comprimento total de cadeia simples (ss). Os conectores possuem saliências aleatórias de 6-bp (dN6 ou dGN5) que podem se ligar a qualquer sequência de cDNA, facilitando assim a produção de bibliotecas de cDNA com títulos superiores a 1 x 10(6) clones independentes. Confirmamos que as extremidades 5' dos insertos de cDNA clonados por meio do SSLLM são de comprimento total e incluem as regiões não traduzidas 5'. A grande vantagem do nosso método é que a eliminação da cauda GC simplifica o sequenciamento e a tradução de proteínas dos clones de comprimento total. Além disso, nosso método marca cDNAs ss de maneira mais eficiente do que a reação tradicional de ligase de RNA.