Purificação de uma protease alcalina do fígado que degrada a forma oxidativamente modificada da glutamina sintetase. Caracterização como uma cisteína proteinase de alto peso molecular.

Uma protease alcalina não lisossômica que degrada a forma oxidativamente modificada da glutamina sintetase de Escherichia coli foi purificada até aparente homogeneidade a partir de pós de acetona de fígado de rato e camundongo. Seu peso molecular foi determinado como 300.000 por filtração em gel Sephacryl S-300, mas os resultados de estudos adicionais usando filtração em gel por cromatografia líquida de alta pressão sugerem um valor de 650.000. A exame da estrutura da subunidade por eletroforese em gel de poliacrilamida com lauril sulfato de sódio mostrou múltiplas bandas com pesos moleculares entre 22.000 e 34.000. A protease alcalina foi inibida por reagentes tiol. O fluoreto de fenilmetilsulfonila, aprotinina, leu Puneptina, antipaina e quimostatina inibiram parcialmente a protease. A inibição pelo fluoreto de fenilmetilsulfonila foi evitada por ditiotreitol, e a alfa 1-antitripsina e inibidor de tripsina de soja não inibiram. Nenhuma inibição foi observada com inibidores de metaloprotease. A protease alcalina é ativa em uma ampla faixa de pH, com atividade ótima para a degradação da glutamina sintetase oxidada em torno do pH 9.0. Sua atividade não é estimulada por MgATP. Um estudo dos produtos da degradação da cadeia B da insulina demonstrou os principais locais de clivagem em Gln13-Ala14, Leu15-Tyr16, Cys(SO3H)19-Gly20, Gln4-His5 e Leu17-Val18. Com base em sua atividade endopeptidase e especificidade de inibidor, a protease alcalina deve ser classificada como uma cisteína proteinase. Parece ser distinta das proteinases descritas anteriormente e provavelmente está envolvida em mecanismos não lisossômicos de renovação de proteínas intracelulares.