Transferência de proteínas através de membranas. II. Reconstituição de microsomos rugosos funcionais a partir de componentes heterólogos.

Os dados apresentados neste artigo demonstram que subunidades ribossomais pequenas nativas de reticulócitos (contendo fatores de iniciação) e subunidades ribossomais grandes derivadas de polissomos livres de reticulócitos pelos procedimentos de puromicina-KCl podem funcionar com microsomos despojado derivados de microsomos rugosos do pâncreas de cachorro em um sistema de síntese de proteínas in vitro em resposta ao mRNA da cadeia leve de IgG adicionada, de modo a segregar o produto da tradução em um espaço resistente à proteólise. Não houve tal segregação para o produto da tradução do mRNA da globina. Além de sua capacidade de segregar o produto da tradução de um mRNA heterólogo específico, microsomos rugosos nativos do pâncreas de cachorro, assim como microsomos despojados derivados, foram capazes de processar proteoliticamente o maior produto da tradução primário de uma maneira aparentemente correta, como evidenciado pelo peso molecular idêntico do produto da tradução segregado e da cadeia leve autêntica secretada. A segregação, bem como o processamento proteolítico por microsomos nativos e despojados, ocorreu apenas durante a tradução em andamento, mas não após a conclusão da tradução. Tentativas de solubilizar a atividade de processamento proteolítico, presumivelmente localizada na membrana microsomal pelo tratamento com detergente, e de alcançar o processamento proteolítico da proteína precursora completa da cadeia leve falharam. Juntas, esses resultados estabelecem inequivocamente que a informação para a segregação de um produto de tradução está codificada no próprio mRNA, não no aparato de síntese de proteínas; isso fornece fortes evidências em apoio à hipótese do sinal.