Purificação do receptor de glicocorticoide do citosol do fígado de rato.

O receptor de glicocorticoide etiquetado com 3H-triamcinolona acetonida do citosol do fígado de rato foi purificado a 85% de homogeneidade de acordo com a eletroforese em gel de sulfato de sódio. Consistiu em uma subunidade com um peso molecular de 89.000 e tinha um sítio de ligação de ligante por molécula. A purificação envolveu cromatografia sequencial em fosfocelulose, DNA-celulose duas vezes e Sephadex G-200. Entre as duas etapas de cromatografia em DNA-celulose, o receptor foi ativado por calor. O receptor foi eluído por afinidade da segunda coluna de DNA-celulose com fosfato de piridoxal 5'-fosfato. A purificação alcançada nas três primeiras etapas cromatográficas variou entre 60 e 95% de homogeneidade em diferentes experimentos. Após a cromatografia na segunda coluna de DNA-celulose, o complexo esteróide.receptor teve um raio de Stokes de 6,0 nm e um coeficiente de sedimentação de 3,4 S em 0,15 M KCl. Na ausência de KCl, o coeficiente de sedimentação foi de 3,6 S. Após concentração em hidroxilapatita, o complexo esteróide.receptor foi analisado por focagem isoeléctrica em gel de poliacrilamida. A radioatividade foi mostrada para focar junto com a banda de proteína majoritária com pI 5,8. Após proteólise limitada com tripsina, a radioatividade, juntamente com a banda de proteína majoritária, focou em pI 6,2, como descrito anteriormente para o complexo esteróide.receptor não purificado.