A indução do fluxo de cálcio citosólico pelo CD20 depende da sinalização do receptor de antígeno de células B

O anticorpo monoclonal anti-CD20 (mAb) rituximabe é agora utilizado rotineiramente para o tratamento de linfoma não-Hodgkin e está sendo examinado em uma ampla gama de outras desordens de células B, como artrite reumatoide. Apesar de estudos intensivos, o mecanismo de ação ainda permanece incerto. No estudo atual, foi investigada a sinalização de cálcio induzida por mAb anti-CD20. Anteriormente, agrupamos mAbs anti-CD20 em Tipo I (semelhante ao rituximabe) e Tipo II (semelhante ao B1) com base em várias características, como sua capacidade de induzir ativação de complemento e redistribuir CD20 em domínios de membrana insolúveis em detergente. Aqui mostramos que apenas mAbs do Tipo I são capazes de induzir um fluxo de cálcio em células B e que isso está fortemente correlacionado com a expressão do receptor de antígeno de células B (BCR). A análise de inibidores revelou que a cascata de sinalização empregada pelo CD20 era strikingly similar àquela utilizada pelo BCR, com inibidores de Syk, Src e PI3K, mas não EGTA, p38 ou ERK1/2, completamente abolindo o fluxo de cálcio. Além disso, a ligação de mAbs do Tipo I, mas não do Tipo II, causou associação direta do CD20 com o BCR, conforme medido por FRET, e resultou na fosforilação de proteínas adaptadoras específicas do BCR, BLNK e SLP-76. Crucialmente, células variantes Ramos que não expressam BCR, mas com a expressão de CD20 inalterada, foram completamente incapazes de induzir fluxo de cálcio após a ligação do CD20. Coletivamente, esses dados indicam que o CD20 induz fluxo de cálcio citosólico através de sua capacidade de associar-se e "sequestrear" o potencial de sinalização do BCR.