Melhora associada ao bloqueio mitótico da glicosilação O-ligada e fosforilação das queratinas humanas 8 e 18.

O bloqueio da linha celular coloquial humana HT29 na fase G2/M do ciclo celular resultou em mudanças na montagem de queratina que foram acopladas a um aumento significativo na glicosilação O-ligada e fosforilação de serina dos polipeptídeos de queratina 8 e 18 (K8/18). Com o bloqueio mitótico, a fosforilação de queratina aumentou preferencialmente em K8, enquanto K18 mostrou um nível de glicosilação mais alto do que K8. A remoção do agente bloqueador permitiu que as células avançassem pelo ciclo celular com uma diminuição concomitante na glicosilação de K8/18. Em contraste, queratinas isoladas de células enriquecidas em fase S, obtidas após sincronização com aphidicolin, não mostraram glicosilação aumentada. A análise de peptídeos trópticos de queratinas em células presas na fase G2/M mostrou mudanças no padrão de glicosilpeptídeos de K8 e nos padrões de fosfopeptídeos de K8 e K18. A rotulação de imunoprecipitados de K8/18, isolados de células bloqueadas na fase G2/M, com 3H-galactose seguida por beta-eliminação mostrou que a glicosilação de K8/18 consistiu em resíduos únicos de N-acetilglucosamina. Treonina foi identificada como o local de glicosilação após comparar produtos de hidrólise ácida de K8 e K18 beta-eliminados e não beta-eliminados. A clivagem específica em resíduos de triptofano indicou que a glicosilação e fosforilação de K18 estavam restritas aos domínios da cabeça e da haste proximal, enquanto K8 não mostrou a mesma restrição. Nossos resultados mostram uma associação única do tipo de modificação O-ligada N-acetilglucosamina única das queratinas com o bloqueio mitótico nas células HT29. Não houve relação recíproca entre a glicosilação de K8/18 e fosforilação, e cada queratina mostrou um aumento preferencial associado ao ciclo celular G2/M em fosforilação de serina ou glicosilação de treonina.